CAS：31282-04-9
分子式:C20H37N3O13
分子量:527.52
溶解性：溶于水，50 mg/mL
- 产品介绍：
Hygromycin B(潮霉素B)是来源于吸水链霉菌(Streptomyces hygroscopicus)的一种氨基糖苷类抗生素，对细菌，真菌和哺乳动物细胞均有抑制作用和细胞毒性。常用于转染大肠杆菌潮霉素抗性基因的细胞选择抗生素。
作用机制：
Hygromycin B(潮霉素B)通过干扰蛋白翻译过程中70S和80S核糖体易位，诱导对mRNA模板的错误翻译而抑制细胞蛋白质的正常合成，从而导致细胞死亡。
耐药性机制：
大肠杆菌来源的Hygromycin B抗性基因(hyg或hph)所编码的Hygromycin B磷酸转移酶可将Hygromycin B磷酸化，导致其失去活性，从而起到解毒作用。[1]
潮霉素B的抗性基因（hyg或hph）除了来自E. Coli.之外，还发现于其他的菌株，包括Streptomyces hygroscopicus和Klebsiella pneumoniae。
图1 潮霉素B的化学结构，磷酸化位点由箭头标示
- 应用：
1.筛选和维持培养稳定转染Hph+载体的原核或真核细胞（植物细胞和哺乳动物细胞）
大肠杆菌(Escherichia coli.)来源的潮霉素抗性基因（hyg或hph），编码潮霉素B磷酸转移酶，将潮霉素B转化成不具有生物活性的磷酸化产物，从而起到解毒作用。针对这一原理，潮霉素B是一种非常有用的选择性标记，用来筛选和维持培养成功转染潮霉素抗性基因的原核或者真核细胞。[2]
2.由于作用模式的差异，潮霉素B常与遗传霉素G418，博来霉素和杀稻瘟菌素s联合使用，筛选稳定转染两个不同载体的细胞株。
3.抗病毒剂，由于潮霉素B选择性渗透进入因病毒感染增强通透性的细胞，而且具有抑制翻译的功效。[3]
4.作为一种高度多功能的次级代谢产物诱导剂，适用于多种真菌。[4]
5.作为驱虫药加入动物饲料中，饲养动物。[5]
- 使用说明：
1. 储存液配制（50 mg/mL）
称取0.5 g潮霉素B加入 10 mL 1×PBS，PH 7.4，充分溶解后用 0.22 μm 滤器过滤除菌，
分装成单次使用的小量（如 1 mL），-20℃避光保存，1 年稳定。
2. 常用筛选浓度
潮霉素B用来筛选稳转株的工作浓度需要根据细胞类型，培养基，生长条件和细胞代谢率而变化，推荐使用浓度为 50-1000 μg/mL。对于第一次使用的实验体系建议通过建立杀灭曲线（kill curve），即剂量反应性曲线，来确定最佳筛选浓度。一般而言，哺乳动物细胞：50-500 μg/mL；细菌/植物细胞：20-200 μg/mL；真菌：300-1000 μg/mL。
3. 杀灭曲线的建立
对第一次使用的实验体系，建议通过制作杀灭曲线（kill curve）来确定最佳筛选浓度：
（1）以番茄叶片转基因试验为例：准备含设定浓度潮霉素 B的分化培养基，浓度设置为3μg/ml、5μg/ml、7μg/ml、9μg/ml、12μg/ml五个梯度。
（2）准备番茄幼苗叶片，每个浓度准备60个叶片，做 3 个平行试验，每个试验做20个叶片。
（3）番茄叶片外植体培养3周左右，约7天更换一次新鲜的筛选培养基。每日观察外植体的生长情况。14-21天可以观察到死亡的外植体，能够杀死番茄的最低浓度即为筛选用的工作浓度。
