DTT即DL-Dithiothreitol，中文名称为二硫苏糖醇，是一种高效水溶性巯基还原剂，可裂解蛋白分子内及分子间二硫键，维持蛋白巯基还原状态，有效抑制蛋白氧化聚集。广泛用于SDS‑PAGE电泳、蛋白纯化、酶活性分析、RNA提取等分子生物学实验，能够降低RNase带来的降解干扰。常作为蛋白折叠研究、二硫键相关机理探究的关键试剂，适配体外酶反应、样品前处理等多种科研场景。
主要科研实验用途
1.SDS-PAGE / Western blot（变性还原电泳）
样品缓冲液中添加DTT，煮沸变性，断裂蛋白二硫键，拆开多亚基蛋白，消除二硫键介导蛋白聚集体，获得准确条带分子量
2. 蛋白纯化、亲和层析（Ni-NTA、GST）
洗脱 / 结合缓冲中添加DTT，保护蛋白半胱氨酸，防止蛋白氧化沉淀
3. 巯基依赖型酶活性测定（半胱氨酸蛋白酶、激酶等）
反应体系中添加DTT，维持酶活性中心半胱氨酸的还原状态
控制实验中DTT浓度，调控二硫键重排，辅助蛋白正确折叠
5.蛋白质组学、肽图、氨基酸测序前处理
还原蛋白二硫键，后续再用碘乙酰胺烷基化封闭巯基
低浓度DTT抑制非特异性氧化聚集
核心功能与作用原理
DTT分子上含有两个巯基(‑SH)。在环境pH大于7的时候，巯基会解离成带负电的硫醇盐，具备还原能力。
第一步：DTT其中一个带负电的硫醇盐，去攻击蛋白质上的二硫键(‑S‑S‑)。二硫键断裂，会生成一个不稳定的过渡复合物(混合二硫键中间体)，此时蛋白质会释放出1个游离巯基。蛋白二硫键被DTT断裂示意图
第二步：DTT自身的第二个巯基发生分子内闭环反应，进攻上面这个不稳定中间体。最终形成结构十分稳定的六元环氧化DTT，蛋白质原本的二硫键被彻底断开，两个半胱氨酸全部生成游离的巯基。
