Triton X-100 裂解液使用指南：细胞/组织蛋白提取、Western 与 IP 必备

一、Triton X-100 是什么？

Triton X-100，全称 Octylphenol ethoxylate，是一种常用的非离子型去污剂。它在生物化学实验中非常常见，可用于裂解细胞、溶解膜蛋白、清洗免疫印迹膜等。

主要功能

常见应用浓度

注意：过高浓度可能导致蛋白复合物解离，一些膜蛋白也可能被过度溶解或变性。另外，Triton X-100 含芳香环结构，对环境不友好，欧盟已限制生产，实验中也可考虑 Triton X-114 或 NP-40 Substitute 等替代品。

二、Triton X-100 裂解液能做什么？

Triton X-100 裂解液由 Triton X-100、NaCl、Tris-HCl 等组成，并含有多种蛋白酶抑制剂成分，可有效抑制蛋白降解，并维持原有的蛋白间相互作用。

其原理是利用去污剂 Triton X-100 破坏脂质双分子层，溶解胞质和细胞膜，破坏分子间微弱结合键的大部分蛋白质抗原。Triton X-100 浓度在 0.1%–1% 时即可满足几乎所有溶解需求，并可补充等离子浓度的盐及使 pH 接近中性。

用该裂解液得到的蛋白样品，可以用 BCA 蛋白浓度测定试剂盒测定蛋白浓度。但由于含有较高浓度去垢剂，不能用 Bradford 法测定由 Triton X-100 裂解液获得的样品。

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四、操作步骤

（一）贴壁培养细胞

取 Triton X-100 裂解液置室温融解混匀，加入 PMSF，使 PMSF 终浓度为 1 mM。
去除贴壁细胞的培养液，用 PBS、生理盐水或无血清培养液清洗 1 次，低速离心，弃上清，留取沉淀。如果血清中的蛋白没有干扰，也可以不用清洗。
按照 6 孔板每孔加入 150–250 μl 含有 PMSF 的 Triton X-100 裂解液，用移液器轻轻吹打，使裂解液和细胞充分接触，置于冰上或 4℃裂解。通常裂解液作用于细胞 1–3 s 内，细胞就会被裂解。如果细胞密度非常高，可适当加大裂解液用量到 200–250 μl。
10000–12000 g，4℃离心 5–10 min（如无低温离心机，室温下离心亦可），取上清。
进行后续 SDS-PAGE、Western、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。

（二）悬浮培养细胞

取 Triton X-100 裂解液置于室温融解混匀后，加入 PMSF，使 PMSF 终浓度为 1 mM。
低速离心悬浮细胞，弃上清，收集沉淀。
用手指轻弹细胞，使其松散。按照 6 孔板每孔细胞加入 150–250 μl 含有 PMSF 的 Triton X-100 裂解液。如果细胞密度非常高，可适当加大裂解液用量到 200–250 μl。再用手指轻弹以充分裂解细胞，充分裂解后应没有明显细胞沉淀。
10000–12000 g，4℃离心 5–10 min（如无低温离心机，室温下离心亦可），取上清。
进行后续 SDS-PAGE、Western、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。

（三）组织样本

取 Triton X-100 裂解液置于室温融解混匀后，加入 PMSF，使 PMSF 终浓度为 1 mM。
把组织剪切成细小的碎片，越小越好。
取在液氮或超低温冰箱中冷冻 30 min 以上的组织，迅速研磨，研磨过程尽量控制在 1–2 min 之内，以减少蛋白降解。
按照每 20 mg 组织加入 150–250 μl 裂解液的比例，加入含有 PMSF 的裂解液，冰上或 4℃裂解 15–30 min。
步骤 3、4 亦可采用如下过程：按照每 20 mg 组织加入 150–250 μl 裂解液的比例加入含有 PMSF 的 Triton X-100 裂解液。用玻璃匀浆器或组织研磨器匀浆，直至充分裂解，该过程尽量控制在 1–2 min 之内，以减少蛋白降解。
10000–12000 g，4℃离心 5–10 min（如无低温离心机，室温下离心亦可），取上清。
进行后续 SDS-PAGE、Western、免疫沉淀和免疫共沉淀等操作。

五、一句总结

Triton X-100 是一种温和的非离子去污剂，用于裂解细胞、溶解膜蛋白，同时尽可能保持蛋白天然构象和相互作用。 Triton X-100 裂解液则适合常规蛋白提取、Western、IP 和 co-IP 等实验。使用时记住三点：冰上操作、临用前加 PMSF、避免反复冻融。

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