产品信息
产品简介：
蛋白上样缓冲液主要由 TRIS、SDS、溴酚蓝、还原剂等组成。SDS 可与蛋白质结合使蛋白质-SDS 复合物上带有大量的负电荷，这使蛋白质本身的电荷完全被 SDS 掩盖，消除了各种蛋白质本身电荷的差异；SDS 还可以断开分子内和分子间的氢键，破坏蛋白质分子的二级结构和三级结构。还原剂可以断开半胱氨酸残基之间的二硫键，破坏蛋白质结构，消除了蛋白结构之间的差异，最终无电荷及结构上差异的蛋白（亚单位），电泳速度只是与其分子量大小有关。溴酚蓝作为电泳指示剂，可大概指示电泳结束的时间。SDS-PAGE 蛋白加样缓冲液(5×,含 TCEP)即 SDS-PAGE Sample Loading Buffer(5×,with TCEP)，是一种经过改良的更加安全、更加健康的无气味的以溴酚蓝为染料，5 倍浓缩的蛋白上样缓冲液。
本产品使用了无气味、水溶性更稳定、还原能力相近的还原剂[三(2-羧乙基)膦盐盐,TCEP]替代了有气味的D-二硫苏糖醇(DTT)或β-巯基乙醇(2- Mercaptoethanol)，从而可以确保本 SDS-PAGE 蛋白上样缓冲液在正常使用或加热时都不会有异味，使蛋白上样操作更加安全健康。该试剂仅用于科研领域，
不适用于临床诊断或其他用途。
操作步骤(仅供参考)：
1、在室温或不超过 37℃的水浴中溶解 SDS-PAGE 蛋白加样缓冲液(5×,含TCEP)，水浴溶解后立即室温存放，尽量避免长时间置于水浴中。使用完毕后应置于-20℃保存。
2、取适量的蛋白样品和 SDS-PAGE Sample Loading Buffer(5×)按 4:1 混合，充分混匀。如 40μl 蛋白样品加入 10μl 上样缓冲液 (5 倍稀释)来使用。如果蛋白样品浓度过高，可用双蒸水稀释。
3、95℃水浴加热 5～10min，以充分变性蛋白。
4、冷却到室温后，经 10000~14000rpm 离心 2~5min，取上清直接上样电泳。
5、通常电泳至蓝色染料到达胶的底部附近即可停止电泳。
注意事项：
1、本产品用于蛋白变性时，建议 95ºC 水浴或 PCR 仪加热 5 分钟，温度过高(如 100ºC)或时间过长(如超过 15 分钟)，有可能会导致蛋白降解或上样缓冲液中指示剂的颜色异常。
2、SDS-PAGE 蛋白上样缓冲液(5X,含 TCEP)中不含剧毒的巯基乙醇和有刺激性气味的 DTT，但还原效果一致，对于蛋白样品的处理效果和电泳效果一致。
3、SDS-PAGE 蛋白上样缓冲液(5X,含 TCEP)必须完全溶解后再使用。建议根据使用量和频率分装冻存，应避免反复冻融。
4、本产品含有溴酚蓝指示剂，pH 受温度影响，颜色可能有所不同；低温冻存条件下，呈深棕色~深蓝色凝固状态，不影响正常使用。
5、本产品稀释至 1X 后可以直接用于细胞或组织样品的裂解。
6、加热前通常会发现蛋白样品内有粘稠的半透明状物体，通常在本上样缓冲液内 95℃水浴加热 8~10 分钟后可使该粘稠的半透明状物体消失，便于后续的上样操作。如果起始时细胞或组织的用量较大，基因组 DNA 含量较高，加热5~10 分钟后有可能仍然比较粘稠或者有粘稠状的半透明物体，此时需要再加热5-10 分钟或者加入适量 1X 的蛋白上样缓冲液后再加热 3~5 分钟。充分加热后一方面可以使结合在基因组 DNA 上的蛋白充分释放，同时会导致基因组 DNA的部分断裂从而使粘稠感消失，这样就不会影响后续的上样操作了。适当超声或使用 1ml 注射器反复抽吸也可以打断基因组 DNA 从而使粘稠感消失。
7、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
